Voksne katolikker, menn og kvinner, fra alle kulturelle lag, nasjonaliteter, sosiale sjikt og levestandarder kan bli medlemmer, om de anser at Gud kaller dem til å tjene Ham helt og fullt midt i verden, og av egen fri vilje svarer ja på dette kallet. Å bli medlem i Opus Dei innebærer nemlig alltid et kjærlighetsbånd, som svar på Guds kall. For tiden er det ca. 85 000 medlemmer i Opus Dei.