Cộng tác viên của Opus Dei là những người nam và người nữ – bao gồm cả người Công giáo và người không Công giáo – tuy không thuộc nhân sự của Giám hạt Opus Dei, nhưng cùng cộng tác với các tín hữu của Opus Dei trong các hoạt động giáo dục, bác ái và văn hóa khác nhau.
Sự đóng góp chính yếu của các Cộng tác viên cho các hoạt động này chính là lời cầu nguyện, ngoài ra họ cũng có thể hỗ trợ bằng việc làm hoặc tài chính. Họ được hưởng các ơn ích thiêng liêng mà Giáo hội ban tặng cho những ai trợ giúp Opus Dei. Các ơn ích này bao gồm các ơn toàn xá mà các Cộng tác viên có thể lãnh nhận vào những ngày cụ thể trong năm, hoặc khi họ sốt sắng lặp lại cam kết cộng tác viên của mình, với điều kiện tuân giữ các quy định mà Giáo hội đã thiết lập. Họ cũng nhận được sự nâng đỡ thiêng liêng từ lời cầu nguyện của tất cả các thành viên trong Giám hạt Opus Dei.
Việc trở thành Cộng tác viên không đòi hỏi một ơn gọi cụ thể nào. Thông thường, Cộng tác viên là thân nhân, bạn bè, đồng nghiệp hoặc người thân cận của các thành viên Opus Dei; hoặc là những người có lòng sùng kính Thánh Josemaría, những người tham gia vào các hoạt động tông đồ của Giám hạt, hay những ai quan tâm đến các công tác giáo dục và xã hội được thực hiện qua các sáng kiến tông đồ của các tín hữu Opus Dei. Để trở thành Cộng tác viên, không nhất thiết phải là người Công giáo. Cha Đại diện của Đức Giám quản tại mỗi quốc gia có thể bổ nhiệm một cá nhân làm Cộng tác viên, sau khi người đó được một thành viên của Opus Dei đề cử.
Các Cộng tác viên, nếu có nguyện vọng, có thể tham dự các khóa đào luyện của Opus Dei. Việc đào luyện này giúp họ đào sâu thêm đời sống thiêng liêng của mình, thêm lòng yêu mến và ủng hộ Đức Giáo hoàng và các Đức Giám mục, đồng thời làm chứng tá cho ơn gọi Kitô hữu của mình trong tư cách cá nhân mà không cần hoạt động theo nhóm.
Nhiều người cũng tìm thấy cơ hội để thực hành và truyền bá cho những người xung quanh một trong những đặc tính cốt lõi của linh đạo Opus Dei: đó là thánh hóa công việc hằng ngày cũng như các bổn phận trong gia đình và xã hội với tư cách là những Kitô hữu bình thường.
Các cộng đoàn tu trì cũng có thể được bổ nhiệm làm Cộng tác viên của Opus Dei. Sự cộng tác của các cộng đoàn này (hiện đang có khoảng 500 cộng đoàn) chính là lời cầu nguyện hằng ngày cho các hoạt động của Giám hạt Opus Dei.