Niet-katholieke christenen en mensen van andere religies kunnen geen deel uitmaken van de Prelatuur. Zij kunnen wel met het Opus Dei meewerken. De medewerkers bidden voor het Opus Dei en dragen met praktische en financiële hulp bij aan de sociale en maatschappelijke initiatieven van gelovigen van de Prelatuur in heel de wereld. Er zijn orthodoxe, protestantse, joodse, islamitische, boeddhistische en ook niet-religeuze medewerkers van het Opus Dei.